Obtención de una construcción molecular para alterar genéticamente la producción de manitol en la cepa ambiental Ed8 de Aspergillus tubingensis

Abstract

Los compuestos de cromo son contaminantes ambientales debido a su uso en diferentes actividades industriales; el cromo hexavalente [Cr(VI)], en la forma de cromato y dicromato, es altamente tóxico y genotóxico para distintas formas de vida, habiéndose descrito que esto es debido a que produce estrés oxidativo en las células. Dado que se ha propuesto que el manitol funciona como amortiguador de especies reactivas de oxígeno y como fuente de poder reductor en las células y que se ha reportado que en A. niger la producción de manitol ocurre por la acción de la enzima manitol 1-fosfato deshidrogenasa, codificada por el gen m1pd, en el presente proyecto se realizaron experimentos para obtener una construcción molecular para realizar la interrupción del gen m1pd en la cepa ambiental Ed8 de A. tubingensis. Para ello, se utilizó la estregia de “Split Marker” (marcador interrumpido) que se basa en el PCR de fusión, mediante la cual se generaron dos fragmentos de aproximadamente 1.5 kb del gen m1pd (fragmentos 5’ y 3’) fusionados cada uno a un fragmento que corresponde a aproximadamente 3/4 partes del casete de resistencia a higromicina (HygR). Los fragmentos generados se denominaron 5MH y 3MH.