Efecto de la mutación en el carboxilo-terminal de la isocitrato liasa (ICL) de Pseudomonas aeruginosa sobre patogenicidad de la bacteria

Abstract

Para poder crecer en sustratos no gluconeogénicos, el isocitrato liasa, la primera enzima del ciclo del glioxilato, redirecciona al isocitrato alejándolo del ciclo de los ácidos tricarboxílicos (CAT) y dirigiéndolo hacia el ciclo del glioxilato. La ICL de Pseudomonas aeruginosa (PaICL) es considerada como un factor de virulencia debido a su función en la asimilación de carbono durante la infección. El extremo carboxilo (C-terminal) de las ICLs de la subfamilia 1 está relacionado con la función enzimática, por lo que propusimos determinar la función del C-terminal en la función de la PaICL y si está involucrado en la virulencia de P. aeruginosaPAO1. El C-terminal de la PaICL se modificó por la adición de una etiqueta de histidinas, generando a la CILC. También se generó a la NICL, que corresponde a la PaICL con una etiqueta de histidinas en el extremo amino. La CICL fue menos eficiente que la NICL; sin embargo, no se reflejó en el crecimiento de la mutante A39 complementada con la CICL, ya que creció en acetato en la misma proporción que PAO1. Se determinó que las interacciones iónicas son críticas para la estabilización del homotetrámero de la PaICL. Además, el homotetrámero de la CICL fue menos estable, sugiriendo que el C-terminal es importante para la conformación cuaternaria de la enzima. La mutante A39 complementada con las variantes de la PaICL fue más virulenta que la cepa PAO1. Estos resultados confirman que en P. eruginosa la ICL es esencial para la asimilación de acetato y virulencia.