Determinación de ácidos grasos insaturados, utilizando diferentes estrategias de derivatización y herramientas de espectrometría de masas

Abstract

El objetivo de este trabajo fue lograr el etiquetado de los átomos de carbono presentes en enlaces dobles de ácidos grasos insaturados (AGIs), mediante la formación de FAMEs y una derivatización secundaría (bromación), para permitir la identificación/confirmación y cuantificación de estos compuestos por espectrometría de masas con ionización suave (ESI-QTOF-MS) en infusión directa. Tomando en cuenta las relaciones m/z de las señales presentes en espectros de masas y los patrones isotópicos de iones de las moléculas bromadas, se confirmó la bromación efectiva de los FAMEs con hasta 3 insaturaciones, añadiendo dos átomos de bromo por cada insaturación. Se realizaron curvas de calibración para mezclas de isómeros de los FAMEs C18:1, C18:2y C18:3 bromados y se obtuvieron los principales parámetros analíticos. Los valores de R2 obtenidos se encontraron entre 0.9915 y 0.9980, los LOD instrumentales entre 6.4-47 ng mL-1 y LOQ entre 21-155 ng mL-1. Se determinaron las concentraciones totales de isómeros de C18:1 y C18:2 en una muestra de aceite de aguacate las cuales en porcentajes de masas correspondieron a 62.31 ± 5.65 % y 1.42 ± 0.13% respectivamente, con RSD < 10%. Se utilizó la plataforma web CFM-ID 4.0 para calcular in-silico los espectros de fragmentación de los FAMEs bromados. Los resultados obtenidos de los cálculos in-silico predijeron la formación de fragmentos característicos de interés donde los átomos de bromo marcan posición de enlaces dobles. A continuación, se llevaron a cabo experimentos MS/MS empleando tres diferentes mecanismos de fragmentación (CID, bbCID e isCID), examinando diferentes energías de colisión en cada caso. En desacuerdo con los cálculos in-silico, los resultados de los experimentos MS/MS no fueron alentadores porque durante la fragmentación del ion precursor siempre ocurría la perdida de átomos de bromo en forma de HBr, incluso al aplicar muy bajas energías de colisión y también utilizando isCID y bbCID. Por ello, en los experimentos realizados no fue posible asignar la posición de los enlaces dobles. Como resultado final del trabajo realizado, se establecieron las condiciones de bromación de los FAMEs y de su análisis por ESI(+)-QTOF-MS, logrando la cuantificación de AGIs agrupados como isómeros con una, dos y tres insaturaciones, pero sin poder distinguir entre estos isómeros ni asignar la posición de enlaces dobles. Como prospectiva de un trabajo futuro se propone afinar el proceso de fragmentación en el sistema ESI(+)-QTOFMS para que los iones fragmento conserven átomos de bromo.