Purificación, características bioquímicas y localización intracelular de una dihidrodiol deshidrogenasa inducible por fenantreno en Mucor circinelloides cepa YR-1

Abstract

La cepa YR-1 de Mucor circinelloides fue aislada de un sitio contaminado con petróleo como un posible organismo degradador de HPAs. Nuestro grupo de trabajo ha demostrado la capacidad del hongo para crecer en presencia de hidrocarburos tanto alifáticos como aromáticos, además de utilizarlos como fuente de carbono y energía. En el presente trabajo, se analizó la acumulación de naftaleno, fenantreno y pireno en estas células mediante microscopía de fluorescencia; se estandarizó la metodología y se determinaron las condiciones óptimas, para detectar, mediante zimogramas, la actividad cis-naftalendiol de extractos libres de células crecidas con fenantreno. Además, se realizó la purificación parcial y caracterización bioquímica de una probable oxidorreductasa inducible por fenantreno que probablemente es la responsable de la deshidrogenación, denominada PDD1, la cual incluyó la estimación de las constantes de unión para los sustratos de la enzima. Los resultados observados sugieren que la enzima PDD1 es capaz de usar los sustratos cis y trans-naftalendiol. También se realizó el análisis de la enzima purificada parcialmente mediante espectrometría de masas en un sistema MALDI-TOF. Se encontró que, en el homogenado había más de una proteína; una de ellas identificada como S2JH17 presenta el plegamiento de Rossmann necesario para llevar a cabo la actividad DD y característico de las enzimas que unen NAD ó NADP. Estos datos sugieren que la proteína S2JH17 es la mejor candidata a ser la enzima PDD1. Finalmente se realizaron experimentos preliminares para determinar la localización intracelular de la actividad cis-ndd, por medio de gradientes isopícnicos de sacarosa. Los resultados sugieren la localización de dicha actividad en una población microvesicular.